María Isabel del Palatinado-Zweibrücken,. Noble alemana, era la primogénita del conde palatino y duque Juan I del Palatinado-Zweibrücken y de Magdalena de Cléveris. Sus abuelos paternos era el conde palatino y duque Wolfgang del Palatinado-Zweibrücken y Ana de Hesse. Sus abuelos maternos fueron el duque Guillermo V el Rico de Jülich, Cléveris y Berg y de la archiduquesa austriaca María de Habsburgo.